一、免疫診斷原理有哪幾種

免疫診斷是應(yīng)用免疫學(xué)的理論、技術(shù)和方法診斷各種疾病和測定免疫狀態(tài)的診斷方法，目前免疫診斷的平臺和方法有多種多樣，但是都基于相同或相似的原理，主要有五大基本原理：

1、雙抗體夾心

（1）原理：雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法，雙抗體夾心法適用于測定擁有至少兩個表位的大分子抗原。不適用于測定半抗原及小分子單價抗原，不能形成兩位點夾心。

（2）應(yīng)用場景：絕大多數(shù)檢測蛋白都可以使用雙抗體夾心法。有些抗體檢測項目，如總IgE檢測。

（3）注意事宜：在一步法，待測抗原與標(biāo)記抗體一起加入反應(yīng)中，當(dāng)標(biāo)本中受檢抗原的含量很高時，過量抗原會分別和固相包被抗體及標(biāo)記抗體結(jié)合，不會形成“夾心復(fù)合物”就出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)，導(dǎo)致結(jié)果偏低或者甚至可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

2、雙抗原夾心

（1）原理：雙抗原夾心法的反應(yīng)模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和標(biāo)記。有研究表明，雙抗原夾心法檢測抗體的靈敏度和準(zhǔn)確性要抗體檢測使用的間接法（檢測抗體更為常用的一種方法）。

（2）應(yīng)用場景：理論上，檢測抗體的項目均可使用，如乙肝表面蛋白抗體檢測。待檢抗體IgG的兩個Fab需要分別同固相包被抗原和標(biāo)記抗原同時結(jié)合。

（3）注意事宜：抗原標(biāo)記過程可能導(dǎo)致蛋白構(gòu)象變化，需要尋找最適合的標(biāo)記物和標(biāo)記方法。

3、間接法

（1）原理：間接法是檢測抗體常用的方法。其原理為利用標(biāo)記的抗抗體，俗稱二抗，來檢測與固相包被抗原結(jié)合的受檢抗體。本法主要用于對病原體抗體的檢測而進行傳染病的診斷。

（2）應(yīng)用場景：所有的IgG抗體檢測都可以使用。如新冠血清IgG檢測。

（3）注意事宜：本方法的優(yōu)點是只要變換包被抗原的種類就可利用同一標(biāo)記抗抗體（二抗）建立檢測相應(yīng)抗體的方法。

4、競爭法

（1）原理：當(dāng)小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個表位供包被和檢測抗體同時識別結(jié)合，因此不能用雙抗體夾心法進行測定，可以采用競爭法模式。由于物質(zhì)的相互作用或者結(jié)合是相對動態(tài)平衡的過程，一旦樣本中存在待檢測物，樣品中的待檢測物會同試劑中的標(biāo)記物去競爭結(jié)合包被物。這樣就會導(dǎo)致原來結(jié)合在一起的包被物和標(biāo)記物分離，使原本飽滿的信號值進行降低。信號降低的程度同待檢測物的濃度成正相關(guān)。

（2）應(yīng)用場景：小分子抗原或半抗原，如激素檢測，雌二醇，睪酮；甲狀腺功能檢測，T4，T3等。

（3）注意事宜：競爭法中，有些待檢測物分子特別小，很難制備或找到適合使用的抗體，而且生理條件下可以同其他蛋白結(jié)合，那么可以使用該分子的結(jié)合蛋白來代替抗體實現(xiàn)。如，25OH-Vd檢測，可使用25OH-Vd特異性抗體，也可使用Vd結(jié)合蛋白。

5、捕獲法（反向間接法）

（1）原理：捕獲包被法，又稱為反向間接法，采用抗抗體（二抗）包被，抗原進行標(biāo)記的檢測方法。以目前常用的IgM測定為例，因血清中針對某種抗原的特異性IgM和IgG同時存在，則后者可干擾IgM的測定。因此先將所有血清IgM（包括異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再測定特異性IgM。

（2）應(yīng)用場景：IgM測定最為常見，特定過敏原IgE檢測。

（3）注意事宜：IgM型類風(fēng)濕因子（RF）的干擾，IgE型類風(fēng)濕因子相對較少。

二、免疫診斷有什么特點

1、特異性強，不出現(xiàn)交叉反應(yīng)，不出現(xiàn)假陽性，可保證診斷的準(zhǔn)確性。

2、靈敏度高，能測出微量反應(yīng)物質(zhì)和輕微的異常變化，有利于早期診斷和排除可疑病例。

3、簡便、快速、安全。